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BBT緩沖液(pH8.6)

更新時間:2022-02-09

簡要描述:

BBT緩沖液(pH8.6)專門應用于電泳相關實驗,例如瓊脂糖凝膠電泳實驗,醋酸纖維素膜電泳實驗,檢測血清蛋白等電點等等相關實驗

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BBT緩沖液(pH8.6)

使用舉例:用于白蛋白(或丙種球蛋白)純度測定

(醋酸纖維素薄膜電泳法)

1試劑

1.1 BBT緩沖液(Ph8.6)

1.20.5%氨基黑染色液

取氨基黑10B0.5g,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及蒸餾水40ml的混合液中。

1.3漂洗液

取乙醇45ml,冰醋酸5ml及蒸餾水50ml,混勻。

1.40.2mol /L氫氧化鈉

取8g氫氧化鈉,加蒸餾水溶解成1000ml。

1.5透明液

取冰醋酸25ml,加無水乙醇75ml,混勻。

2 操作

2.1電泳

將膜條(2×8cm)粗糙面向下,浸入BBT緩沖液中,待*浸透,取出用濾紙吸去多余的緩沖液,將膜條粗糙面向上,加于電泳支架上的濾紙橋上(或橋下),于膜上距負極一端2cm處,直線狀滴加蛋白質含量約5%的樣品2~3μl,通電,電流控制在0.4~0.6mA/cm[總電流量=生產要膜的寬度(cm)×膜條數],同時取新鮮人血清作對照,電泳時間以白蛋白與丙種球蛋白之間的電泳展開距離達3~4cm為宜。

2.2 染色

電泳完畢,將膜條取下浸于染色液中,2~3分鐘后,用漂洗液反復漂洗至底色*脫凈。

2.3 透明

將漂凈并*干后的膜條浸于透明液至全部浸透為止,取出平鋪于潔凈的玻璃板上,干后即成透明薄膜,可供掃描法測定樣品純度和作為標本長期保存用。

2.4 純度測定

2.4.1 洗脫法:將漂洗凈的膜條用濾紙吸干,與正常人血清的電泳圖譜作對照,剪下白(或丙種球蛋白)帶A及其他雜蛋白質區帶B,分別浸于5ml0.2mol/L氫氧化鈉溶液中,振搖數次,至色澤*浸出后,于620nm波長下測其OD值,以相同條件下,無蛋白質部分的膜條(其長度分別同A及B)作空白對照。

樣品中白蛋白(或丙種球蛋白)含量%=A的OD值-A空白的OD值/(A的OD值-A空白的OD值)+(B的OD值-B空白的OD值)×100%

2.4.2 掃描法:將干燥的樣品醋酸纖維素薄膜電泳圖譜放入自動光密度掃描儀,通過反射(未透明薄膜)或透射(已透明薄膜)方式測定各蛋白質電泳區帶的OD值,根據儀器性能,可自動或手工方法計算出樣品白蛋白(或丙種球蛋白)的百分含量。

附注

用掃描法測定白蛋白(或丙種球蛋白)純度時,可采用麗春紅染色法,其染色液及漂洗液配方如下:

0.2%紅染色液:

取麗春紅0.2g,磺基水楊酸3g及三氯醋酸3g,用蒸餾水溶解并稀釋至100ml。

漂洗液:

取冰醋酸3ml,用蒸餾水稀釋至100ml。

BBT緩沖液(pH8.6)

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