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膽固醇檢測服務

更新時間:2019-11-06

簡要描述:

信帆生物銷售膽固醇試劑盒,同時提供膽固醇檢測服務,能夠幫你對樣本進行膽固醇檢測。
當固醇類化合物與酸作用時,可脫水并發生聚合反應,產生顏色物質。

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一、原理

當固醇類化合物與酸作用時,可脫水并發生聚合反應,產生顏色物質。因此可先對食品樣品進行皂化和提取,用硫磷鐵試劑作為顯色劑,測定食品中膽固醇的含量。
    在樣品的冰乙酸提取液中加磷硫鐵試劑,膽固醇與試劑反應產生紫紅色化合物,顏色的深淺與膽固醇的量成正比,可用分光光度計在波長560nm處測定。

二、實驗儀器及試材
1.儀器:分光光度計、水浴鍋
2.試劑:本實驗用水均需用蒸餾水或去離子水。試劑純度均為分析純。
(1)石油醚(沸點30-60℃)、無水乙醇、冰乙酸。
(2)50%氫氧化鉀溶液:稱取50g氫氧化鉀,用蒸餾水溶解,并稀釋至100mL。
(3)25%氯化鈉溶液:稱取25g氯化鈉,用蒸餾水溶解,并稀釋至100mL。
(4)10%三氯化鐵溶液:將10gFeCl3·6H2O溶于磷酸中,定容至100mL,儲于棕色瓶中,冷藏保存。
(5)磷硫鐵試劑:取10%三氯化鐵溶液1.5mL于100mL棕色容量瓶內,加濃硫酸定容至刻度。
(6)膽固醇標準儲液:準確稱取膽固醇100mg,溶于冰乙酸中,定容至100mL。
(7)膽固醇標準溶液:臨用前將儲液用冰乙酸稀釋10倍。

三、實驗方法與步驟
1.樣品膽固醇提取
準確稱取充分混勻的雞蛋約0.20g于25mL具塞比色管中,加入0.5mL50%氫氧化鉀溶液和4.5mL無水乙醇,振蕩混勻,在80℃恒溫水浴中皂化20min。皂化時每隔5min振搖一次使皂化*。皂化完畢,取出比色管,冷卻。加入3mL25%氯化鈉溶液后再加入10mL石油醚,蓋緊玻璃塞,振搖1min,靜置分層。
    取上層石油醚液1mL,置于25mL具塞比色管內,在65℃水浴中讓石油醚自然揮發干,加入4mL冰乙酸,輕搖使膽固醇溶解,待測。
2.樣品和標準膽固醇含量測定另取兩支25mL具塞比色管,一支(空白管)加入4mL冰乙酸,一支(標準管)加入1mL膽固醇標準溶液(0.1mg/mL)和3mL冰乙酸。包括樣品管,各管分別加入2mL磷硫鐵試劑,混勻,25℃放置20min后在560nm波長下比色。以空白管調零,測得吸光度。

四、計算

雞蛋膽固醇(mg/100g)=A樣/A標╳0.025mg/mL╳4mL╳10mL/1mL╳100/M樣g
                   =A樣/A標╳100/M樣(mg/100g)

五、實驗注意事項
濃硫酸、強堿溶液具有腐蝕性,小心操作。

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