產品中心您現在的位置:首頁 > 產品展示 > > 實驗代測服務 > MMP2/9活性MMP2/9活性含量檢測服務

MMP2/9活性含量檢測服務

更新時間:2019-11-06

簡要描述:

信帆生物銷售MMP2/9活性試劑盒,同時提供MMP2/9活性檢測服務,能夠幫你對樣本進行MMP2/9活性檢測。
該基因是基質金屬蛋白酶(MMP)基因家族的成員,是一種鋅依賴的酶,能夠切割細胞外基質的成分和參與信號轉導的分子。

  免費咨詢:025-65010873

  發郵件給我們:196099363@qq.com

MMP2是位于16號染色體的基因。
MMP-9基因位于染色體20q11.1~13.1,26~27kbp,具有13個外顯子和9個內含子,屬于基質金屬蛋白酶(matrix metalloprotein,MMP )家族。主要功能是降解和重塑細胞外基質(extracellular matris)的動態平衡。

作用功能
該基因是基質金屬蛋白酶(MMP)基因家族的成員,是一種鋅依賴的酶,能夠切割細胞外基質的成分和參與信號轉導的分子。該基因編碼的蛋白是明膠酶A,IV型膠原酶,其催化位點中含有三個纖維連接蛋白II型重復序列,使變性IV型膠原和V型膠原與彈性蛋白結合。與大多數MMP家族成員不同,這種蛋白的激活可以發生在細胞膜上。這種酶可以被蛋白酶細胞外激活,也可以被S-谷胱甘肽化而被胞內激活,而不需要蛋白質溶出的前區。該蛋白被認為參與多種途徑,包括作用于神經系統,子宮內膜月經破裂,調節血管化,和轉移。該基因突變與Winchester綜合征和結節病-關節病-骨溶解綜合征(NAO)有關。選擇性剪接會導致編碼不同異構體的多個轉錄體變異。

檢測步驟:
1. 制備含MMP 底物蛋白的SDS-PAGE 凝膠:推薦分離膠濃度為8%。按照標準程序制備SDSPAGE
凝膠。將10 × substrate G 融化,并90 ?C 加熱5 分鐘。分別在濃縮膠和分離膠中額外加
入10 × substrate G 并使之稀釋10 倍,混勻后加入過硫酸銨和TEMED,等待凝膠聚合。
2. 待測樣品1:1 稀釋于2 × SDS-PAGE non-reducing buffer (用完后可自行配制:4% SDS, 100 mM
Tris-Cl pH6.8, 20% glycerol, 0.02% bromophnol blue),混合后直接上樣。切勿加熱變性,并且僅
使用不加還原劑的上樣緩沖液??赏ㄟ^預試驗確定加樣量,使用普通蛋白預染Marker 即可。陽
性對照(可選步驟):可取人、小鼠、大鼠或兔100μl全血與100μl 2 × SDS-PAGE nonreducing
buffer 等體積混合,取5-15μl 上樣。
3. 低電流恒流電泳,每一塊小膠電流為20 mA/gel。溴酚藍跑出凝膠前沿時結束電泳。
4. 洗滌凝膠:取出凝膠,去除濃縮膠,放入容器內??上扔眠m量蒸餾水沖洗凝膠,然后加入10 ml
1× Buffer A(用蒸餾水稀釋),室溫漂洗凝膠2 × 30 分鐘。中間換液。
5. 孵育:倒掉Buffer A。加入10 ml 1× Buffer B(蒸餾水稀釋),室溫或37?C 孵育1~5 小時。陽性
對照或者血中的MMP 通常37?C 孵育1 小時即可顯示。如MMP 活性低,應延長孵育時間為
10 小時或過一夜。
6. 顯色:倒掉Buffer B,加入SDS-PAGE 凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液(操作步驟見SDS-PAGE
凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液說明書)。凝膠的大部分區域被深染,在有MMP 條帶的位置
不被染色而形成透亮區域。透明區域的位置和范圍指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及
活性。陽性對照將在66~72 (MMP-2)、92 (MMP-9)、130 (proMMP-9)、225 (proMMP-9) kDa
位置出現透明條帶。
7. 條帶掃描:將凝膠放在掃描儀上掃描。雖然MMP 條帶透明,但凝膠背景并非真正全黑。解決
辦法:可用非透射光掃描,或用軟件圖像處理程序調整背景顯示為灰度顯示,并盡量設置為黑色。
MMP 條帶則為白色,這種背景黑條帶白的格式是英文論文中zui常見的格式。

 

留言框

  • 產品:

  • 您的單位:

  • 您的姓名:

  • 聯系電話:

  • 常用郵箱:

  • 省份:

  • 詳細地址:

  • 補充說明:

  • 驗證碼:

    請輸入計算結果(填寫阿拉伯數字),如:三加四=7
南京億迅生物科技有限公司

南京億迅生物科技有限公司

地址:江蘇省南京市江寧高新園

主營產品:化學試劑,標準品,質控品,氨基酸,植物激素,科研試劑盒等

版權所有:南京億迅生物科技有限公司  備案號:蘇ICP備2020061857號-1  總訪問量:276575  站點地圖  技術支持:環保在線  管理登陸

韩国精品无码一区二区免费_国产日韩精品中文字无码_亚洲性爱日韩无码_国产精品热久久Av