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CCK試劑盒實驗中的小技巧,你學會了嗎
發布時間:2020-07-17   點擊次數:808次

CCK試劑盒實驗中的小技巧,你學會了嗎

 

 Cell Counting Kit簡稱 CCK 試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。 

 

細胞活性檢測 

1、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養板放在培養箱中預培養(在37℃,5% CO2的條件下)。 

2、向每孔加入10 μL的CCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。 

3、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。 

4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。 

5、如果暫時不測定OD值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。 

 

細胞增值-毒性檢測 

1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時(在37℃,5% CO2的條件下)。 

2、向培養板加入10μL不同濃度的待測物質。 

3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(例如:6、12、24或48小時)。 

4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。 

5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。 

6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。 

7、如果暫時不測定OD值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。 

注意:如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加CCK之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。 

 

實驗小技巧:

①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK試劑后的培養時間。 

②有條件的情況下建議采用多通道移液器,可以減少平行孔減的差異。加入CCK試劑時,建議斜貼著培養板壁加,不要插到培養基頁面下加,容易產生氣泡,會干擾OD值讀數。 

③白細胞可能需要培養較長時間。 

④當使用標準96孔板時,貼壁細胞的小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL 培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL 培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗,請先計算每孔相應的接種量,并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK溶液。 

 

CCK試劑盒實驗中的小技巧,你學會了嗎

 

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